АННОТАЦИЯ
В представленной paботе изучено влияние состава и полярности подвижной фазы на подвижность метронидазола в ходе элюирования и селективности хроматотрафической системы.
Экспериментально установлено, что оптимальная подвижность метронидазола наблюдается при использовании системы растворителей следующего состава: толуол-ацетон- этанол 95%. Подобрано оптимальное соотношение растворителей 27:9:3 по объему.
Ключевые слова: метронидазол, тонкослойная хроматография, подвижная фаза, селективность, специфичность, унификация.
Метронидазол является эффективным антибактериальным и антипротозойным лекарственным препаратом широкого спектра фармакологического действия. [1-4].
Большое разнообразие лекарственных форм метронидазола (таблетки, инфузионный раствор 0,5%, суппозитории, гель, вагинальные таблетки) и методов анализа требует усовершенствования методов его контроля [5].
В связи с этим, проблема совершенствования существующих и разработка современных доступных методик анализа метронидазола являются актуальными.
Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) находит широкое применение в фармацевтическом анализе для идентификации, анализа чистоты лекарственных средств [6-9].
Рекомендуемые методы хроматографического анализа метронидазода имеют ряд недостатков: трудоемкость, применение токсичных органических растворителей, дорогостоящих реактивов и приборов. В связи с этим, нами был изменен качественный и количественный состав подвижной фазы для хроматографирования субстанции и лекарственных форм метронидазола в тонком слое сорбента.
Целью данной работы является выбор состава подвижной фазы для хроматографического анализа метронидазола в субстанции и лекарственных препаратах.
Материалы и методы. В работе использованы лекарственная субстанция (ГФ РК, т. II, стр.316) и лекарственные препараты метронидазола. В частности, таблетки следующего состава: метронидазол 0,5 г., крахмал картофельный, желатин, крахмальный сироп, магния стеарат (АНД РК 42-980-10); 1% гель состава: метронидазол 0,1 г., метилпарагидроксибензоат, пропилпарагидроксибензоат, карбомер 940, пропиленгликоль, динатрия эдетат, натрия гидроксид, вода очищенная (АНД РК 42-1955-11); инфузионный раствор 0,5%: метронидазол 0,5 г., натрия хлорид, кислота лимонная моногидрат, динатрия гидрофосфат безводный, натрия гидроксид, вода для инъекций (АНД РК 42-4185-17); суппозитории вагинальные состава: метронидазол 0,5 г. и твердый жир (АНД 42-1859-10), а также вагинальные таблетки - метронидазол 0,5 г., целлюлоза микрокристаллическая, повидон, кросповидон, кремния диоксид коллоидный и кислота стеариновая (АНД РК 42-3715-11). В эксперименте использованы толуол (gradient grade, Scharlau), ацетон (gradient grade, Scharlau) и этанол 95%.
Для идентификации использован комплект приборов для тонкослойной хроматографии: хроматографические пластинки «Кизельгель» фирмы «Merck» 10x20 на алюминиевой подложке, покрытые слоем силикагеля УФ 254толщиной 0,25 мм.; УФ-хроматоскоп, микрокапилляры объемом 10 мкл (Россия).
Условия хроматографирования. Хроматографирование проводили в стеклянных камерах, в которые помещали соответствующую смесь растворителей. Камеру плотно закрывали и оставляли на 2 ч для насыщения парами растворителей.
Техника проведения анализа. На линию старта хроматографических пластинок наносили 10 мкл 0,001% раствор метронидазола в этаноле и хроматографировали восходящим способом. Когда фронт растворителя достигал финиша (10 см от линии старта), пластинку вынимали из камеры, высушивали на воздухе и просматривали в УФ-свете при длине волны 254 нм.
Нами были приготовлены растворы стандартного образца вещества-свидетеля (СОВС) и исследуемые растворы лекарственных препаратов метронидазола.
Приготовление раствора стандартного образца вещества свидетеля (СОВС) метронидазола. 0,001 г (точная навеска) метронидазола растворяли в 50 мл спирта этилового 95 % в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводили объем тем же растворителем до метки и перемешивали. Приготовление исследуемых растворов лекарственных форм метронидазола проводили с учетом количественного содержания в них метронидазола и характером вспомогательных веществ.
На хроматограмме испытуемых растворов основные пятна соответствуют по Rf и интенсивности окраски пятну на хроматограмме стандартного раствора вещества-свидетеля метронидазола.
Результаты и обсуждения. Выбор состава подвижных фаз был основан на кислотноосновных свойствах метронидазола. Полярность подвижной фазы оценивали по диэлектрической проницаемости входящих в состав растворителей [10-13].
Нами изучены подвижные фазы, содержащие следующие растворители: толуол, хлороформ, этилацетат, ацетон, этанол, метанол, вода. Было отмечено, что при увеличении содержания в подвижной фазе компонентов с большой полярностью и высокой элюирующей способностью, таких, как вода, этанол 95%, метанол, раствор аммиака концентрированный подвижность метронидазола становится достаточно высокой, и пятно оказываются либо на уровне фронта ПФ, либо с Rf > 0,9. В составе почти любой ПФ можно найти компонент сорбционно менее активный, выполняющий преимущественно транспортную функцию, и сорбционно активный, который служит для регулирования равновесия. Роль одного и того же компонента в различных подвижных фазах и в зависимости от характера НФ, может быть различной.
|
№ |
Система растворителей |
Rf |
|
1 |
хлороформ-этанол 95% (9:1) |
0,1 |
|
2 |
метанол-хлороформ (4:8) |
0,7 |
|
3 |
хлороформ-этанол 95%- раствор аммония гидроксида конц. (45:45:3) |
0,3 |
|
4 |
ацетон-этанол 95% - раствор аммония гидроксида конц. (40:20:5) |
0,12 |
|
5 |
толуол-ацетон-этанол 95% - раствор аммония гидроксида конц. (45:45:3:2) |
0,4 |
|
6 |
толуол-ацетон-этанол 95% (9:3:1) |
0,5 |
Таблица 1 - Значения Rf метронидазола в исследованных хроматографических системах (n=6)
Из таблицы 1 следует, что метронидазол имеет оптимальные значение Rf в пределах 0,5. При использовании экспериментально подобранной подвижной фазы наблюдаются компактные пятна метронидазола без «хвостиков».
Детектирование проводили с помощью УФ-света при длине волны 254 нм и реактива Драгендорфа, модифицированного по Мунье. При детектировании с помощью УФ-света наблюдались четкие, компактные и интенсивно проявляющиеся пятна метронидазола. При детек-тировании с помощью реактива Драгендорфа пятно метронидазола имело бледную оранжевую окраску.
Проверка пригодности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора СОВС четко видно пятно метронидазола, Rf которого должно иметь значение 0,50±0,02 (при использовании подвижной фазы состава: толуол- ацетон-спирт (9:3:1 по объему).
На хроматограмме с использованием экспериментально подобранной подвижной фазы пятна исследуемого лекарственного препарата как в СОВС, так и в лекарственных формах имеют R на уровне 0 50±0 02 (рис.1).
115
В качестве одного из компонентов подвижной фазы был выбран толуол, который широко применяется в анализе фармацевтических препаратов, а также обладает высокой разрешающей способностью, низкой вязкостью, доступностью, сравнительно низким токсическим действием [14-15].
Экспериментально подтверждено, что для увеличения селективности хроматографической системы необходимо использовать ацетон. Снижение эффекта размывания пятен удалось добиться введением в ПФ этанола 95 %.
Была подтверждена селективность разработанной методики при проведении испытания с образцами исследуемых лекарственных форм, не содержащими метронидазола - плацебо. При хроматографировании растворов-плацебо метронидазола на хроматограммах отсутствовали пятна, соответствующие по Rf пятну стандартного раствора метронидазола.
Выводы. Экспериментально установлен состав подвижной фазы для хроматографического анализа метронидазола в субстанции и лекарственных формах, состоящий из толуола-ацетона- этанола 95% в соотношении 9:3:1 (по объему). Результаты эксперимента демонстрируют
чувствительность и селективность разработанной методики с выбранной смесью растворителей для ТСХ-анализа.
ЛИТЕРАТУРА
- Смагулова Б.Б. О пресечении распространения фальсифицированной медицинской продукции в Республике Казахстан// Фармация Казахстана.-2014 №7.-С 10-12
- Падейская Е.Н. Метронидазол - антимикробный препарат для лечения бактериальных и протозойных инфекций// РМж.-2010. - С. 909-914
- Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 16-ое издание.-2012 г., т. II.-С.- 322-324
- Справочник Видаль 2013 г. Лекарственные препараты в России. Vidal 2013.-С.276-278
- Теплых А.Н., Илларионова Е.А. Количественное определение метронидазола спектрофотометрическим методом // Сибирский
- ГФ Республики Казахстан.- том II.- 2009.-С.541-544
- ГФ Российской Федерации XII.- часть I -2007.-С. 346-347
- U.S. Рһагтасороіеа. - 30,32 NF.- 2007.- Р. 377-380
- British Рһагтасороеіа.-V.- I.- 2009.-Р.301-303
- Беликов В.Г. Фармацевтическая химия. В 2 ч: Учебн. пособие - М.: МЕД пресс-информ,- 2008.-С. 713.
- Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин, Д.С. Вязова, В.Ф. Сравнительная оценка физикохимических методов контроля качества метронидазола.-Дзюба Воронежский государственный университет
- Ф.Гейсс. Основы тонкослойной хроматографии (планарная хроматофафия), том 1,2,Москва. 1999.
- И.И.Евгеньева. Планарная хроматография и анализ органических веществ. Соросовский образовательный журнал, №11, 1999, с. 50-55.
- О.Б.Рудаков, И.П.Седшцев. Обобщённый критерий полярности растворителей как средство управления хроматофафическим процессом. Известия Академии наук. Сер. Химическая. №1,2(Х)3,с. 17-19.
- О.Б.Рудаков. Растворитель как средство управления процессом в хроматографии. Воронеж: ВГУ. 2003.