Паразитофауна представляет собой важную часть биоценозов, выполняя регуляторные функции. Их разнообразие и устойчивость служит гарантией сохранения экологического равновесия [1]. Бесхвостые амфибии, благодаря постоянной связи, как с почвой, так и с водой постоянно подвергаются инвазии различными видами паразитов [2]. Наиболее распространенным паразитом среди амфибий является нематода Rhabdias bufonis [3]. Данный вид паразита является гетерогенной формой, имеющей свободное обоеполое и гермафродитное паразитарное поколения. Свободное поколение паразита живет в почве, а их личинки проникают через рот и покровы в лягушек. Далее они по лимфатической системе распространяются по всему телу, проникая при этом во многие внутренние органы. В лягушке личинки паразита превращаются в гермафродитное поколение. По литературным данным гермафродиты локализуются в легких, в пределах которых они выделяют свои яйца. Яйца из легких попадают в ротовую полость, где заглатываются, локализуются и развиваются в тонкой кишке. Личинки скапливаются в толстой кишке и выводятся во внешнюю среду. В дальнейшем из них формируется свободноживущее поколение паразитов [4]. Нередко нематоды паразитируют в присутствии других видов паразитов, например, таких как легочные трематоды Нaplometra cylindracea[7].
Целью нашего исследования было изучить локализацию паразитарной формы нематоды Rhabdias bufonis и ее влияние на гистоструктуру внутренних органов лягушки озерной.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Объектом исследования послужила лягушка озерная, которая была отловлена в протоке Нарын, расположенного в северо-восточной части дельты р. Иле, в 20 км западнее посёлка Караой. Протока расположена в заболоченной низменности, поросшей тростниками и окруженная барханами. Наибольшая численность лягушек наблюдалась в застойных и медленнотекущих старицах протоки, где численность популяции составила 25 особей на 100 метров.
Исследованию были подвергнуты 12 особей лягушки (11 самцов, 1 самка), со средней массой 45,27±5,16 г и средней длинной тела - 81,5±3,2 мм, у которых для гистологического анализа были взяты желудок, кишечник, почки, гонады, мышцы.
Определение внутриполостных гельминтов производилось по Рыжикову с соавторами [5]. Биологический материал для гистопатологического анализа был обработан с помощью стандартных методик. Препараты были окрашены гематоксилином и эозином и окраской по Массону [6; 7].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Вскрытие показало сильную внутриполостную паразитарную инвазию у всех изученных нами лягушек. Паразиты брюшной полости представляли собой светлые шаровидные образования, которые при фиксации в формалине, раскручивались и превращались в круглых червей (рисунок 1). Проведенное нами определение позволило установить принадлежность паразита к виду Rhabdias bufonis, семейства Rhabdiasidae.
Тело паразитов имело веретенообразную форму, а средняя длина тела колебалась от 0,8 до 7 мм. Со стороны головы имелись небольшого размера осязательные сосочки (папиллы). По бокам передней плоскости головы располагались амфиды, или боковые органы. Ротовая полость имела форму удлиненного цилиндра (рисунок 1 А). В глубинном отделе этого цилиндра были видны "глоточные бугры". В суженной части ротовой полости между "глоточными буграми" были расположены мелкие зубчики, называемые онхами. Следует отметить присутствие половых продуктов у внутриполостных особей (рисунок 2).
У всех исследованных особей лягушки желудок имел типичное для амфибий строение. Паразитов в желудке отмечено не было.
Слизистая кишечника была образована многочисленными продольными складками, несущими складочки 2 го порядка. Складки извивались и анастомозировали между собой. Ложномногорядный эпителий, выстилающий складки, был представлен энтероцитами с щеточной каемкой и бокаловидными мукоцитами. Между складками кишечника встречалось большое количество паразитов. Паразиты имели достаточно крупные размеры и вытянутую форму. С переднего конца четко определялись две присоски, расположенные рядом. Пищеварительный канал паразита был представлен двумя ветвями, расходящимися в разные стороны и слепо заканчивались. В каудальном отделе, между кишечными трубками, определялись половые железы, заполненные половыми продуктами и полость. Пространство между внутренними органами было заполнено соединительной тканью. Такое строение тела характерно для представителей класса трематод (рисунок 3 А). Нередко отмечалось прикрепление этих паразитов одним концом к эпителиальной выстилке кишечника (рисунок 3 Б). При этом нарушалась целостность и наблюдалась деструкция эпителия. Тяжелых патологических нарушений в слизистой кишечника обнаружено не было, однако в сосудах собственной пластинки слизистой обнаруживался стаз крови, местами наблюдался отек, десквамация эпителия и небольшие очаги некроза эпителия.
В почках была отмечена также паразитарная инвазия, паразиты локализовались как в ткани почки, так и за её пределами. Паразиты были расположены в толстой соединительнотканной капсуле, в свернутом виде, что затрудняло описание. Тело паразита имело достаточно крупные размеры. На переднем конце тела было расположено ротовое отверстие, окруженное губами (рисунок 4 А). Кишечник был представлен одной полой трубкой. Кроме того, в полости тела было обнаружена полость, состоящая из однослойного эпителия и заполненная половыми продуктами. Такое строение тела более характерно для класса нематод, нежели трематод. В случае локализации паразита в ткани почки обнаруживались гранулемы, окруженные воспалительным инфильтратом (рисунок 4А).
В строме почки наблюдались многочисленные очаги воспаления, как в паренхиме органа, так и вокруг крупных сосудов, наблюдался отек стромы, периваскулярный отек, деструкция почечных телец, которая приводила к появлению пустых капсул. Также отмечались деструкция, некроз эпителия почечных канальцев и разрастание соединительной ткани (рисунок 4 Б). На некоторых участках почек отмечались очаги кровоизлияния с обширными некрозами клеток почечных канальцев и отеками. Деструктивные изменения больше затрагивали клетки проксимального, чем дистального отделов нефрона.
Паразиты также были обнаружены в соматической поперечнополосатой мускулатуре, которые были отделены от мышц соединительнотканной капсулой. Тем не менее, в мышечной ткани нами было отмечено два вида паразитов, различающихся по своей морфологии от описанных нами ранее, как в кишечнике, так и в почках (рисунок 5). Процессы инвазии сопровождались явлениями отека между мышечными волокнами, искривлением и расслоением волокон, а также потерей поперечной исчерченности (рисунок 5).
У единственной изученной самки паразитов в яичнике обнаружено не было, но наблюдались многочисленные патологические изменения ооцитов разных фаз развития. В ооцитах цитоплазматического роста наблюдался лизис, как ядра, так и цитоплазмы. В ооцитах трофоплазматического роста отмечались деструктивные изменения цитоплазмы и гомогенизация желтка, а также полное нарушение ядерной кариоплазмы.
Семенники изученных лягушек были поражены паразитами, которые локализовались в ткани семенника (рисунок 6 А). Паразитарная инвазия приводила к многочисленным нарушениям структуры семенников;
наблюдались изменения формы семенных цист, нарушения нормального сперматогенеза, который сопровождался некрозом, геморрагиями (рисунок 6 Б), сперматоцитов первого и второго порядка, лизисом сперматид и
сперматоцитов. Половые клетки в отдельных цистах полностью некротизировались. Учитывая, что сбор материала был произведен в период активного размножения лягушек (21 мая 2011г.) можно предположить, что также как и самки, самцы не участвовали в размножении.
Гистологическая картина показала наличие паразитарной инвазии в следующих органах: кишечник, почки, семенники, яичник и скелетная мускулатура. Причем в кишечнике, семенниках и скелетной мускулатуре были обнаружены трематоды, которые в семенниках и скелетной мускулатуре паразитировали вместе с нематодой, в то время как в почке встречалась только нематода. Во всех исследованных органах наблюдались воспалительные процессы, очаги некроза, отек стромы органа. Следует отметить, что распространение паразитарной инвазии в гонады сопровождалось патологическими изменениями ооцитов разных фаз развития у самок, и к деструкции сперматогенного эпителия у самцов.
ЛИТЕРАТУРА
- Жигилева О.Н., Сурель О.В., Злобина Л.С. Паразитарные сообщества остромордой лягушки на юге Западной Сибири // Вестник экологии, лесоведения и ландшафтоведения. - Тюмень, 2002. - Вып. 3. - С.63-68.
- Тарасовская Н.Е. Значение бесхвостых амфибий в оздоровлении пастбищных и околоводных биотопов от гельминтов // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. - 2009. - № 10(60). - С. 76-79.
- Тарасовская Н.Е., Абдыбекоав A.M., Шалменов М.Ш. Морфометрический анализ нематоды Rhabdias bufonis от разных видов бесхвостых амфибий // Ветеринариялық ғылымдар. - 2011. - С. 87-93.
- Goater C, Ward P. Negative Effects of Rhabdias bufonis Nematoda on the Growth and Survival of the Toads Bufo-Bufo // Oecologia. -1992. - 89(2). - P. 161-165.
- Рыжиков К.М. Гельминты амфибий фауны СССР / К.М. Рыжиков, В.П. Шарпило, Н.Н. Шевченко. - M.: Наука, 1980. - 279 с.
- Ромейс Б. Микроскопическая техника. M.: Изд-во иностр. лит-ры 1953. 718 с.
- Хегай И.В., Кобегенова С.С. Методическое руководство по курсу Основы микротехники. Изд. КазГУ, 1999. - С.46.
- Гашев С.Н. Зооиндикаторы в системе регионального экологического мониторинга Тюменской области: методика использования: монография /С.Н. Гашев, О.Н. Жигилева, Н.А. Сазонова, А.Г. Селюков, С.И. Шаповалов, О.А. Хританько, А.Ю. Косинцева, А.В. Буракова.-Тюмень: изд. Тюменского государственного университета, 2006.-132с.
- Буракова А.В. Особенности заражения гельминтами остромордой лягушки фоновых и урбанизированных территорий // Вестник ОГУ, 2008. - №81 - С. 111-116.