Введение. Лекарственный арсенал отечественной микологии при этиотропной фармакотерапии ограничен четырьмя группами препаратов, из которых основные представлены антифунгальными антибиотиками и производными азола. Антибиотики, как правило, обладают узким спектром действия, эффективны в отношении бактериальной флоры, создают значительные неудобства в терапии кандидоза, осложненного бактериальным компонентом. Производные азола также не лишены серьезных недостатков. Их длительное и системное применение приводит к кумуляции в организме, вызывает угнетение иммунной, половой систем и надпочечников. Кроме того, традиционная фармакотерапия микозов часто приводит к появлению резистентных штаммов патогенных микроорганизмов, аллергических проявлений и нарушений нормального биоценоза [1, 2].
Таким образом, на сегодняшний день существует большое количество препаратов для лечения кандидоза-антимикотиков, но в связи с развитием устойчивости к ним дрожжеподобных грибов, а также усилением патогенности самих грибов, необходим постоянный контроль чувствительности грибов рода Candida к современным препаратам.
Цель работы. Изучение чувствительности дрожжеподобных грибов Candida spp., являющихся возбудителями многих кандидозных заболеваний, к некоторым современным препаратам – антимико-тикам.
В качестве объектов исследования использовали штаммы видов С. albicans, С. tropicalis, C. glabrata и C. krusei из коллекции кафедры биотехнологии Национального фармацевтического университета (эталонные микроорганизмы Украинской коллекции микроорганизмов) и штаммы, выделенные из клинического материала больных дисбактериозом кишечника, воспалительными заболеваниями полости рта, биоматериала женщин, больных генитальным кандидозом, и идентифицированные, как С. albicans, С. tropicalis, C. glabrata и C. krusei.
В ходе проведения экспериментов применяли микроскопические, культуральные методы исследований и лабораторные процедуры, которые проводили по общепринятым в биотехнологии методикам. Выделение дрожжевой флоры из биоматериала, проводили путем посева на агар Сабуро, 5% кровяной агар. Ферментативную активность грибов определяли путем посева чистой культуры на ряд углеводов: лактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу, галактозу. Вид гриба идентифицировали на основании совокупности признаков - морфологических, культуральных, биохимических [1]. Изучение противогрибковых свойств проводили на кафедре биотехнологии Национального фармацевтического университета методом диффузии в агар с добавлением в лунки антимикотиков. Учет результатов проводили путем измерения зоны подавления роста, включая диаметр лунок. Обработку экспериментальных данных проводили с помощью методов математической статистики в соответствии с требованиями ГФУ с использованием MS Exсel 7.0. с применением статистических методов. При определении чувствительности выделенных от больных дисбактериозом и воспалительными заболеваниями верхних дыхательных путей штаммов Candida spp. к таким широко применяемым при лечении данных заболеваний антимикотикам, как флуконазол, нистатин, леворин, кандибене, орунгал, были получены результаты, представленные в табл. 1 и 2.
Таблица 1 - Рост грибов Candida spp., выделенных из биоматериала больных дисбактериозом, при воздействии антимикотиков
|
Вид гриба |
Уровень чувствительности (КОЕ, %) |
||||
|
флуконазол |
нистатин |
леворин |
кандибене |
орунгал |
|
|
C. albicans |
55,4±0,5 |
51,2±0,7 |
42,3±0,4 |
33,2±0,1 |
15,8±0,9 |
|
C. krusei |
62,3±0,4 |
61,7±0,5 |
56,1±0,5 |
50,8±0,4 |
33,6±1,1 |
Таблица 2 - Рост грибов рода Candida spp., выделенных из биоматериала больных
воспалительными заболеваниями рта, при воздействии антимикотиков
|
Вид гриба |
Уровень чувствительности (КОЕ, %) |
||||
|
флуконазол |
Нистатин |
леворин |
кандибене |
орунгал |
|
|
C. albicans |
54,4 ± 0,5 |
44,5 ± 0,3 |
45,1 ± 0,6 |
31,1 ± 0,7 |
12,3 ± 0,4 |
|
C. tropicalis |
55,5 ± 1,1 |
50,5 ± 0,9 |
49,5 ± 1,2 |
49,5 ± 0,5 |
27,3 ±0,5 |
|
C. krusei |
64,7 ± 1,1 |
60,7 ± 1,4 |
59,4 ±0,8 |
50,8 ±1,0 |
38,4 ± 1,8 |
Эталонные штаммы при воздействии всех взятых препаратов практически не проявлял рост, оказались в 95% случаях чувствительны к данным препаратам. Представленные в таблицах 1 и 2 данные свидетельствуют о том, что грибы Candida spp. разных видов обладают неодинаковой чувствительностью к вышеперечисленным антимикотическим препаратам, вне зависимости от места выделения биоматериала. При сравнении полученных данных к эталонному музейному штамму C. albicans, наиболее высокий процент подавления роста при действии флуконазола, нистатина, леворина, кандибене и орунгала наблюдался у циркулирующих штаммов C.albicans, затем у C. tropicalis и у C.krusei. Следовательно, наиболее чувствительными к взятым антимикотикам были штаммы C.albicans, затем – C.tropicalis, а наименее чувствительны–C.krusei.Взятые системные антимикотические препараты в одинаковой степени ингибируют рост колоний, выделенных из разных биоматериалов. Наиболее высокий процент подавления роста циркулирующих штаммов C albicans, C.tropicalis и C.krusei наблюдался при использовании орунгала и кандибене также вне зависимости от места выделения биоматериала. При определении чувствительности выделенных от больных генитальным кандидозом штаммов Candida spp. к таким широко применяемым при лечении данного заболевания антимикотикам, как нистатин, клотримазол, амфотерицин, были получены следующие результаты: в 56% случаев штаммы C.albicans были чувствительны ко всем трем антимикотическим препаратам, остальные штаммы наиболее чувствительны к клотримазолу - в 73% исследований и устойчивы в большинстве случаев к нистатину (68%), амфотерицину-В (71%). То есть, применяемые в настоящее время для лечения генитального кандидоза полиеновые антибиотики нистатин и амфотерицин-В являются наименее эффективными, по сравнению с препаратом имидазолового ряда - клотримазолом.
Выводы. Полученные данные диктуют необходимость широкого применения современных антимикотических средств. Также, следует подчеркнуть значение постоянного мониторинга по выявлению штаммов с потенциальной резистентностью, чтобы прогнозировать снижение чувствительности к антифунгальным средствам.
Литература
1. Багирова Н.С. Определение резистентности Candida spp. к антифунгальным препаратам системного действия эпсилометрическим методом (Е-тест) с учетом видоспецифических особенностей кандид / Н.C. Багирова, Н.В. Дмитриева // Журнал инфектологии. - Том 7, № 3, 2015. – С. 91 -102.
2. Pfaller M.A., Shawn A. Messer, Leah N. Woosley, etc. Echinocandin and triazole antifungal susceptibility profiles for clinical opportunistic yeast and mold isolates collected from 2010 to 2011: Application of New CLSI Clinical Breakpoints and Epidemiological Cutoff Values for Characterization of Geographic and Temporal Trends of Antifungal Resistance. J. Clin. Microbiol. August 2013 Vol. 51 № 8: 2571–2581.