Другие статьи

Цель нашей работы - изучение аминокислотного и минерального состава травы чертополоха поникшего
2010

Слово «этика» произошло от греческого «ethos», что в переводе означает обычай, нрав. Нравы и обычаи наших предков и составляли их нравственность, общепринятые нормы поведения.
2010

Артериальная гипертензия (АГ) является важнейшей медико-социальной проблемой. У 30% взрослого населения развитых стран мира определяется повышенный уровень артериального давления (АД) и у 12-15 % - наблюдается стойкая артериальная гипертензия
2010

Целью нашего исследования явилось определение эффективности применения препарата «Гинолакт» для лечения ВД у беременных.
2010

Целью нашего исследования явилось изучение эффективности и безопасности препарата лазолван 30мг у амбулаторных больных с ХОБЛ.
2010

Деформирующий остеоартроз (ДОА) в настоящее время является наиболее распространенным дегенеративно-дистрофическим заболеванием суставов, которым страдают не менее 20% населения земного шара.
2010

Целью работы явилась оценка анальгетической эффективности препарата Кетанов (кеторолак трометамин), у хирургических больных в послеоперационном периоде и возможности уменьшения использования наркотических анальгетиков.
2010

Для более объективного подтверждения мембранно-стабилизирующего влияния карбамезапина и ламиктала нами оценивались перекисная и механическая стойкости эритроцитов у больных эпилепсией
2010

Нами было проведено клинико-нейропсихологическое обследование 250 больных с ХИСФ (работающих в фосфорном производстве Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции)
2010


C использованием разработанных алгоритмов и моделей был произведен анализ ситуации в системе здравоохранения биогеохимической провинции. Рассчитаны интегрированные показатели здоровья
2010

Специфические особенности Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции связаны с производством фосфорных минеральных удобрений.
2010

Оценка метрологических характеристик методики спектрофотометрического определения инулина

В данной статье приведена актуальность использования инулина в современной медицине. Из перечисленных методов определения количественного содержания полифруктозана описывается методика, основанная на кислотном гидролизе инулина с соляной кислотой на водяной бане с образованием продукта трансформации фруктозы – 5-гидроксиметилфурфурола с дальнейшим спектрофотометрическим определением. Проведена оценка основных метрологических характеристик методики спектрофотометрического количественного определения методом удельного показателя поглощения.

Актуальность проблемы

На сегодняшнее время широкого распространения среди населения всего мира занимают такие заболевания, как сахарный диабет, атеросклероз, алиментарное ожирение. Для профилактики и лечения данных заболеваний в медицине активно используют углеводные полимеры - полифруктаны, в частности инулин [1]. Кроме влияния на обмен веществ, он способствует выведению из организма солей тяжелых металлов, принимает участие в усвоении кальция, железа. По данным некоторых источников, у ү-инулина были выявлены также иммуномодулирующие свойства [2].

Введение

Инулин - резервный полисахарид некоторых видов растений и бактерий [3]. Он представляет собой смесь олиго- и полисахаридов фруктозана. Растительный инулин характеризуется средней степенью полимеризации, и, как правило, состоит из 10-60 молекул фруктозы и одной терминальной молекулы глюкозы [4].

В настоящее время ни один из существующих методов анализа не позволяет определить достоверный качественный состав всех компонентов инулина. Необходима комбинация различных методов исследования для установления структуры нативного инулина. С этой целью широко используются совокупность таких методов анализа, как высокоэффективная жидкостная хроматография, хромато-масс-спектрометрия, высокоэффективная анионообменная хроматография с импульсным амперометрическим детектированием. Для рутинного анализа и количественной оценки содержания инулина в лекарственном растительном сырье (ЛРС) широко используют метод спектрофотомерии в разных вариантах: метод стандарта, удельного показателя поглощения и фотоколориметрирования окрашенных продуктов реакции инулина с различными реагентами [7, 8].

Целью нашей работы является оценка метрологических характеристик методики количественного определения инулина методом прямой спектрофотомерии для установления её возможности использования при анализе вытяжек из ЛРС.

При анализе в сложных природных матрицах наиболее применяемыми методами количественной оценки содержания инулина являются ферментативный и кислотный способы его гидролиза с образованием фруктозы и количественное определение последней [9]. Определению не мешают присутствующие в смеси другие полисахариды, типа амилозы, маннанов, ксиланов или арабинанов [10].

Материалы и методы

Экспериментальные исследования проводили с использованием субстанции инулина № A18425 (количественное содержание 98%) номер партии H5597. Спектрофотометрические определения проводили на спектрофотометре Specord 200. В ходе работы использовали весы аналитические АВ 204 S/A Mettler Toledo, мерную посуду класса А, реактивы, которые отвечают требованиям Государственной Фармакопеи Украины.

Для анализа была выбрана методика количественного определения инулина, основанная на его способности при нагревании с 5% раствором хлористоводородной кислоты в течение 2,5 ч образовывать продукт трансформации фруктозы - 5- гидроксиметилфурфурол, который имеет максимум поглощения в области 285 нм (рисунок 1).

Расчет содержания суммы фруктозанов проводили с использованием удельного показателя поглощения 5-гидроксиметилфурфурола, который равен 298 [7]. Поскольку отечественная нормативная документация на субстанцию инулина отсутствует, с целью оценки результатов количественного определения инулина использовали зарубежный стандарт Official Monographs “Inulin” (The US Pharmacopoeia, XXII), согласно которому содержание фруктозы в инулине должно быть не менее 94% и не более 102%, рассчитанного на сухой препарат. Таким образом, при расчете критериев валидационных характеристик методики анализа использовали регламентированное АНД содержание и допуски содержания 98±4,0%.

Основной целью валидации аналитической методики является доказательство на основе экспериментальных данных того, что методика пригодна или непригодна для решения предполагаемых задач. Валидация методики обязательно предполагает оценку полученных валидационных характеристик по отношению к критериям приемлемости. Поэтому нами были рассчитаны критерии приемлемости с учетом регламентируемых допусков содержания инулина в субстанции и особенностей метода спектрофотометрии в варианте показателя поглощения (таблица 1) [11,12].

Таблица 1 - Критические значения систематической погрешности (max δtot), полной неопределенности анализа (тах∆⑆ś) и параметров линейной зависимости Yi = b^Xi + a для тестируемой методики*

g = 5 точек, допуск содержания 94-102% (В=±4,0%), диапазон применения 80-120%.

субстанция

λ нм

A1%

A1cm

Спотмг /

100мл

Аном

maxΔAs

%

maxδtot =

maxΔprec%

RSDo

%

min R2c

maxa %

maxδ

А%

Инулин

285

298

1,960

0,584

4.0

2.84 ¯¯

1.2

0.9964 ¯¯

5.5

2,42

Поскольку процедура пробоподготовки включает проведение кислотного гидролиза инулина с образованием 5-гидроксиметилфурфурола, необходимо было определить оптимальное время спектрофотометрирования исследуемого раствора.

Исследование стабильности исследуемого раствора проводили на протяжении часа, определяя через каждые 15 минут оптическую плотность раствора (таблица 2).

Таблица 2 - Результаты исследования стабильности исследуемого раствора

Исследуемый раствор

Время исследования стабильности nt, мин.

Cr,t

Sr,t

RSDt,

%

Δt%

maxδt

〇ţ

0

15

30

45

60

А

0,9313

0,9272

0,9230

0,9259

0,9267

77,75

0,28

0,36

0.78

2.8

0,9313

0,9269

0,9214

0,9267

0,9279

0,9313

0,9271

0,9212

0,9261

0,9279

Аср.

0,9313

0,9271

0,9219

0,9262

0,9275

χ _А · 100 · 25

Х ¯ 298 · 0,1 · 1 ,%

78,13

77,77

77,34

77,70

77,81

Обсуждение результатов

В ходе эксперимента было установлено, что неопределенность оптической плотности аналитического раствора составляет Δt=0,78%, и значимо не влияет на результаты анализа (Δt=0,78%≤2,8%=maxδtot). Определение лучше проводить через 30 минут после получения растворов.

Определение параметров линейности методики проводили в диапазоне концентраций от 3.2∙10-5 до 4.8∙10-5 г/мл согласно стандартизованyой процедуре [13]. Линейная зависимость описывается уравнением Y=0,7581x+0,0002 и характеризуется величинами sb=0,018, sa=0,0007, sr=0,0002≤1,00=RSD0, sr/b=0,0003 (отношение остаточного стандартного отклонения прямой к угловому коэффициенту), r2=0,9983≥0,9848=Rc (коэффициент корреляции) (Рисунок 2). График линейной зависимости при

Таблица 3 - Результаты статистической оценки метрологических характеристик методики количественного определения инулина методом спектрофотомерии

№ раствора

Введено в % к концентрации раствора сравнения Xi =(Ci /Cnom)∙100%

Найдено в % к концентрации раствора сравнения

Yi =(Ai* /Anom)∙100%

Найдено в % к введенному

Z = (Yi/Xi)100%

1

80,00 ¯¯

61,10

76,38

2

90,00

68,40

76,00

3

100,00

78,13

78,13

4

110,00

84,04

76,40

5

120,00

93,34

77,79

Среднее, Х%

76,94

Относительное стандартное отклонение, RSDx%

0,89

Относительный доверительный интервал

‰гедº/о = ţ[95Ď/6,4)·ŔŚРх = 2.13∙RSDx

1.90

Критическое значение сходимости результатов

®ргед≤ 2.8%

Соотв.

Систематическая погрешность M- ∣X- 100 ∣ ~~

21.06

Критерий приемлемости систематической погрешности

[?][?][?][?][?]< ⅞[?]Ell?]= 0.63/3 = 0.21 ΞΞ если не выполняется 1), то 2) ĒĒ] ≤ шɑхĒŕоŕĒ][?][?][?][?]

Не соотв.

Вывод о методике

Не корректна

 

Выводы

В ходе проверки метрологических показателей при количественном определении инулина, пришли к выводу, что приведенная методика не корректна, имеет большое значение погрешности. Согласно методике, содержание инулина в пересчете на фруктозу составляет 76,94 %, стандартное отклонение - 0,89 % и относительный доверительный интервал - 1,90 %.

Заниженные результаты анализа инулинового порошка, на наш взгляд, можно пояснить побочными процессами образования гуминовых веществ, а также регидратацией 5-гидроксиметилфурфурола в левулиновую и муравьиную кислоты, которые относятся к весьма слабо поглощающим соединениям в ультрафиолетовой области спектра (и то лишь в коротковолновой области, менее 200 нм). В ходе исследования мы также пришли к выводу, что на эффективность получения 5- гидроксиметилфурфурола существенное влияние оказывает также температура и время проведения кислотного гидролиза, активность воды и концентрация инулина.

Однако, не смотря на заниженные результаты эксперимента, приведенная методика удобна в использовании при рутинном анализе, т.к. расчет производится не по методу стандарта (стандарты инулина различны в зависимости от источника получения), а методом удельного показателя поглощения. К тому же, методика предусматривает пересчет основного вещества на фруктозу, которая представляется собой соединение с фиксированным составом.

Для использования анализируемой методики в рутинном анализе необходима оптимизация условий проведения эксперимента (в частности времени гидролиза) с целью повышения точности и/или же введение коэффициента пересчета (для учета потери вещества при гидролизе).

 

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

  1. Campbell R.K. Type II diabetes mellitus: disease state management // Retail Pharmacy News. - 2009. - Vol. 9. - P. 12-15.
  2. Erdei A. Enhancement of the immune respone by γ-inulin // Abstr. IX Seminar on Inulin. Hungary. - 2002. - Р. 10-11.
  3. Отт В.Д. Роль пребіотиків в дитячому харчуванні / В.Д. Отт, О.М. Муквіч // Проблеми харчування. - 2005. - № 5. - С. 2-5.
  4. Городецкий Г.Б. Получение инулина и других фруктанов из инулинсодержащего сырья / Г.Б. Городецкий, Л.А. Аравина, Н.Я. Иванова // Раст. ресурсы. - 2001. - Т. 15, № 3. - С. 5-9.
  5. Руководство по методам контроля качества и безопасности БАД к пище. - М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. - 240 с.
  6. Quemener B., Thibault J.F. and Coussement P. Determination of inulin and oligofructose in food products and integration in the AOAC method for the measurement of total dietary fibre // Lebensmitt. Wissench Technol. - 1994. - Vol. 27. - Р. 125-132.
  7. Ананьина Н.А. Стандартизация инулина, полученного из клубней георгины простой. Изучение некоторых физико-химических свойств инулина / Н.А. Ананьина, О.А. Андреева, Л.П. Мыкоц, Э.Т. Оганесян // Химико-фармац. Журнал. - 2009. - Т. 43. - №3. - С. 35-37.
  8. Оленников Д.Н. Исследование колориметрической реакции инулина с резорцином в зависимости от условий ее проведения / Д.Н. Оленников, Л.М. Танхаева // Химия раст. сырья. - 2008. - № 1. - С.87-93.
  9. Official Monographs “Inulin” The US Pharmacopoeia, XXII.
  10. Simonovska B. Determination of inulin in foods // Journal of AOAC International. - 2000. - № 83(3). - Р. 675-678.
  11. Стандартизованная процедура валидации спектрофотометрических методик количественного определения лекарственных средств в варианте метода показателя поглощения. Сообщение 1 / А.И. Гризодуб, О.А. Евтифеева, К.И. Проскурина, Е.В. Безумова // Фармаком. - 2014. - № 1. - С. 29-39.
  12. Стандартизованная процедура валидации спектрофотометрических методик количественного определения лекарственных средств в варианте метода показателя поглощения. Сообщение 2 / А.И. Гризодуб, О.А. Евтифеева, К.И. Проскурина, Е.В. Безумова // Фармаком. - 2014. - № 2. - С. 45-54.
  13. Евтифеева О.А. Стандартизованная процедура валидации методик количественного определения экстемпоральных лекарственных средств в условиях аптек и лабораторий по контролю качества / О. А. Евтифеева,
  14. В. А. Георгиянц // Фармаком. - 2007. - № 1. - С. 69-81.

Разделы знаний

Архитектура

Научные статьи по Архитектуре

Биология

Научные статьи по биологии 

Военное дело

Научные статьи по военному делу

Востоковедение

Научные статьи по востоковедению

География

Научные статьи по географии

Журналистика

Научные статьи по журналистике

Инженерное дело

Научные статьи по инженерному делу

Информатика

Научные статьи по информатике

История

Научные статьи по истории, историографии, источниковедению, международным отношениям и пр.

Культурология

Научные статьи по культурологии

Литература

Литература. Литературоведение. Анализ произведений русской, казахской и зарубежной литературы. В данном разделе вы можете найти анализ рассказов Мухтара Ауэзова, описание творческой деятельности Уильяма Шекспира, анализ взглядов исследователей детского фольклора.  

Математика

Научные статьи о математике

Медицина

Научные статьи о медицине Казахстана

Международные отношения

Научные статьи посвященные международным отношениям

Педагогика

Научные статьи по педагогике, воспитанию, образованию

Политика

Научные статьи посвященные политике

Политология

Научные статьи по дисциплине Политология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Психология

В разделе "Психология" вы найдете публикации, статьи и доклады по научной и практической психологии, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. В своих работах авторы делают обзоры теорий различных психологических направлений и школ, описывают результаты исследований, приводят примеры методик и техник диагностики, а также дают свои рекомендации в различных вопросах психологии человека. Этот раздел подойдет для тех, кто интересуется последними исследованиями в области научной психологии. Здесь вы найдете материалы по психологии личности, психологии разивития, социальной и возрастной психологии и другим отраслям психологии.  

Религиоведение

Научные статьи по дисциплине Религиоведение опубликованные в Казахстанских научных журналах

Сельское хозяйство

Научные статьи по дисциплине Сельское хозяйство опубликованные в Казахстанских научных журналах

Социология

Научные статьи по дисциплине Социология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Технические науки

Научные статьи по техническим наукам опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физика

Научные статьи по дисциплине Физика опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физическая культура

Научные статьи по дисциплине Физическая культура опубликованные в Казахстанских научных журналах

Филология

Научные статьи по дисциплине Филология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Философия

Научные статьи по дисциплине Философия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Химия

Научные статьи по дисциплине Химия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Экология

Данный раздел посвящен экологии человека. Здесь вы найдете статьи и доклады об экологических проблемах в Казахстане, охране природы и защите окружающей среды, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. Авторы рассматривают такие вопросы экологии, как последствия испытаний на Чернобыльском и Семипалатинском полигонах, "зеленая экономика", экологическая безопасность продуктов питания, питьевая вода и природные ресурсы Казахстана. Раздел будет полезен тем, кто интересуется современным состоянием экологии Казахстана, а также последними разработками ученых в данном направлении науки.  

Экономика

Научные статьи по экономике, менеджменту, маркетингу, бухгалтерскому учету, аудиту, оценке недвижимости и пр.

Этнология

Научные статьи по Этнологии опубликованные в Казахстане

Юриспруденция

Раздел посвящен государству и праву, юридической науке, современным проблемам международного права, обзору действующих законов Республики Казахстан Здесь опубликованы статьи из научных журналов и сборников по следующим темам: международное право, государственное право, уголовное право, гражданское право, а также основные тенденции развития национальной правовой системы.